CCK-8 实验详解及 Graphpad 作图指南_cck8数据处理及作图

在细胞生物学研究中，细胞活性检测是评估药物毒性、细胞增殖能力的核心实验之一。CCK-8（Cell Counting Kit-8）因操作简便、灵敏度高，成为替代传统 MTT 实验的常用方法。本文将从实验原理、操作步骤到数据处理（含 Graphpad 作图要点）进行详细说明，助力研究者获得可靠结果。

一、CCK-8 实验原理

CCK-8 试剂的核心是WST-8 四唑盐，其检测机制依赖活细胞线粒体脱氢酶的活性：
在电子载体 1-Methoxy PMS 的作用下，WST-8 被还原为水溶性黄色甲瓒产物，生成量与活细胞数量呈正相关。通过酶标仪在 450nm 波长下检测 OD 值，即可间接推算活细胞数量及活性。

CCK-8 与 MTT 的核心区别

指标 CCK-8 MTT 产物性质 水溶性甲瓒（可直接检测） 不溶性甲瓒（需溶解后检测） 操作步骤 无需溶解步骤，减少误差 需加 DMSO / 异丙醇溶解，操作繁琐 数据稳定性 产物稳定，OD 值波动小 溶解不彻底易导致 OD 值偏差 灵敏度 更高（线性范围 0.1-2 OD 值） 较低（易受溶解步骤影响）

简言之，CCK-8 通过省去溶解步骤，大幅降低了操作误差，更适合高通量实验。

二、CCK-8 实验操作步骤

（1）细胞铺板：避免边缘效应是关键

• 细胞密

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